默克 FlowSight 量化成像分析流式細(xì)胞儀

FlowSight是下一代專家級流式細(xì)胞儀
FlowSight是一款體積小巧，但是功能強(qiáng)大的下一代專家級流式細(xì)胞儀。該系統(tǒng)革命性地設(shè)計(jì)提高了信噪比以及熒光檢測的靈敏度。標(biāo)配12個(gè)檢測通道，除了傳統(tǒng)熒光強(qiáng)度信息，還能獲得“每個(gè)細(xì)胞”的明場、暗場以及10個(gè)熒光圖像。FlowSight可以最多配置四根激光管（405, 488, 561, 642 nm），并加配785nm激光器專用于SSC信號檢測，同時(shí)還可配置96孔板自動(dòng)上樣系統(tǒng)（AutoSampler）。FlowSight具有低于10MESF的超高檢測靈敏度，特別對于弱信號的檢測，有明顯的優(yōu)勢。

FlowSight突破傳統(tǒng)流式局限，實(shí)現(xiàn)圈門不再靠猜
FlowSight與其他傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀不同之處在于它帶來了每個(gè)細(xì)胞的真實(shí)圖像。對于每個(gè)細(xì)胞，它能夠生成12張圖片。所獲得的圖片能夠鑒別來自細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜和細(xì)胞核的熒光。您只需點(diǎn)擊散點(diǎn)圖中的每個(gè)點(diǎn)或直方圖中的每個(gè)點(diǎn)，即可查看與之對應(yīng)的細(xì)胞圖片。因此使用者再也不用靠猜測來判斷設(shè)門是否準(zhǔn)確。在FlowSight中，設(shè)門后，使用者可以通過觀察所設(shè)門內(nèi)外的細(xì)胞圖片來確認(rèn)設(shè)門是否準(zhǔn)確。

FlowSight拓展了流式細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用范圍，獲得前所未有的深入的細(xì)胞信息
1. 細(xì)胞周期細(xì)化分析
FlowSight可以將細(xì)胞周期分析和有絲分裂細(xì)胞分析結(jié)合起來。如下圖所示，研究人員利用FlowSight對THP-1細(xì)胞周期進(jìn)行分析（如下圖左圖所示），通過觀察每個(gè)時(shí)期的細(xì)胞圖片，F(xiàn)lowSight不僅可以分析細(xì)胞的G0/G1,S,G2/M期，還可將M期細(xì)分為分裂前期，中期，晚期，末期，獲得最全面的細(xì)胞周期數(shù)據(jù)。
 

2. 八色免疫分型
免疫分型通常用來鑒別血細(xì)胞亞群。FlowSight最多能夠同時(shí)檢測10色熒光，最大程度地滿足研究者的實(shí)驗(yàn)需求。在這個(gè)例子中，研究人員用抗CD45, CD14, CD16, CD19, CD3, CD4和 CD123的抗體以及DAPI染料對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。通過一系列設(shè)門分析，他們鑒別了以下細(xì)胞類群： (A) CD3+ T細(xì)胞, CD4+ 輔助T細(xì)胞; (B) CD16+ 粒細(xì)胞; (C) CD19+ B 細(xì)胞; (D) CD14+ 單核細(xì)胞; (E) CD123+ pDC/嗜堿性粒細(xì)胞.

3．NFkB核轉(zhuǎn)位研究
NF-κβ作為一種廣泛存在的轉(zhuǎn)錄因子，被激活由胞漿轉(zhuǎn)入胞核，從而參與炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生等。可以將細(xì)胞核和NF-κβ分別用DAPI和FITC染色，F(xiàn)lowSight可觀察每個(gè)細(xì)胞是否發(fā)生 NF-κβ核轉(zhuǎn)位，并量化分析NFkB核轉(zhuǎn)位程度以及發(fā)生核轉(zhuǎn)位細(xì)胞的比例。

FlowSight革命性地光路設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)獨(dú)特應(yīng)用
FlowSight系統(tǒng)平臺也是由液流系統(tǒng)，光學(xué)系統(tǒng)和電子系統(tǒng)等三大部分組成。液流系統(tǒng)將樣本細(xì)胞懸液和系統(tǒng)鞘液注入流動(dòng)室中，使細(xì)胞在鞘液流的約束下聚焦在液流的中心，逐個(gè)流過檢測窗口。光學(xué)系統(tǒng)中光源照射通過檢測窗口的細(xì)胞，從而產(chǎn)生光信號。光源分為兩種，其一用于產(chǎn)生明場細(xì)胞圖像，另一種是用于產(chǎn)生熒光細(xì)胞圖像的激光器。光源照射細(xì)胞產(chǎn)生的光信號被大數(shù)值孔徑的物鏡收集，然后通過光路系統(tǒng)傳遞到由二向色鏡構(gòu)成的濾光片堆棧（Dichroic Filter Stack）。光信號在這里被分成不同波段投射到TDI CCD的相應(yīng)檢測通道上，產(chǎn)生一個(gè)明場細(xì)胞圖像，一個(gè)暗場細(xì)胞圖像（Side Scatter，SSC）及至多10個(gè)不同熒光通道的細(xì)胞圖像。FlowSight的光路系統(tǒng)能夠自動(dòng)調(diào)整焦距，并實(shí)時(shí)測定細(xì)胞運(yùn)動(dòng)速度，而其采用高端航空遙拍CCD進(jìn)行信號采集，信噪比比PMT提高10-20倍，上述這些手段保證了系統(tǒng)采集到的細(xì)胞圖像的質(zhì)量和熒光信號的靈敏度。

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